名称：AF594 Ethyl NHS Ester

包装： 瓶装

供应： 西安晖瑞生物

适用范围：仅限科研实验使用

AF594 Ethyl NHS Ester（Alexa Fluor™ 594 乙基NHS酯）介绍

AF594 Ethyl NHS Ester 是一种反应活性良好的荧光标记试剂，广泛用于蛋白质、多肽、抗体、寡核苷酸等含氨基生物分子的荧光标记。该化合物属于Alexa Fluor 系列染料，其激发波长约为590 nm，发射波长约为617 nm，发射光呈红橙色，具备高亮度、优良的光稳定性和低背景特性。NHS酯（N-羟基琥珀酰亚胺酯）结构可与分子中的伯胺快速形成酰胺键，是常用的共价荧光标记试剂之一。

一、分子结构与光谱特性

AF594是Alexa Fluor系列中位于红橙波段的重要成员，其设计基于磺酸类罗丹明衍生物，具有良好的水溶性与光谱特性。Ethyl NHS Ester形式是其一种常见的活性酯类型，便于与生物分子进行偶联反应。

• 激发波长（Ex）：约590 nm
• 发射波长（Em）：约617 nm
• 发射颜色：红橙色
• 荧光寿命与稳定性：光漂白速度慢，适用于长时间成像
• 分子结构：带有磺酸基，提高水溶性和生物体系兼容性

AF594具有较强的荧光强度和出色的信噪比，激发带宽窄，适合与其他荧光染料如FITC、Alexa Fluor 488、Cy5等联合使用进行多重荧光检测。

二、NHS酯反应机理与偶联应用

Ethyl NHS Ester是一种稳定的活性酯，可以在温和的pH（7.2–8.5）条件下与含氨基的分子（如赖氨酸残基）反应形成酰胺键。该反应具有选择性高、速率快的特点，反应完成后可形成稳定的标记复合物。

适合标记的生物分子包括：

• 蛋白质、酶、抗体等大分子
• 多肽、寡核苷酸（如5'-氨基修饰引物）
• 纳米材料、微球或表面氨基修饰的固相载体

常见应用场景：

• 免疫荧光染色（IF）
• 流式细胞术（FACS）
• 共聚焦显微成像
• 荧光原位杂交（FISH）
• 荧光探针构建与传感检测

三、使用与储存建议

使用方法建议：

1. 溶解方式：试剂通常以干燥粉末形式提供，使用前推荐用无水DMSO、DMF或乙腈溶解。
2. 反应缓冲液：使用无胺缓冲液，如PBS（pH 7.4）或HEPES（pH 8.0）。避免Tris、乙醇胺等含氨缓冲液，以免干扰偶联反应。
3. 反应条件：通常在室温下孵育30分钟至1小时。反应完成后，可通过凝胶过滤、透析、亲和层析等方法纯化标记产物。
4. 荧光检测：可使用激发光为561或594 nm的激光器进行激发，适配常用的流式细胞仪和共聚焦显微镜。

储存条件建议：

• 避光、干燥、密封保存
• 推荐储存在 –20°C 或以下的干燥条件中
• 避免反复冻融，现配现用效果更佳
• 溶液状态下可分装冷冻保存，需避免水分进入

四、性能优势

• 高光稳定性：在激光照射下信号维持时间长，适用于长时间或重复成像。
• 荧光强度高：信号明显，背景低，便于图像分析和定量。
• 良好的水溶性：染料带有磺酸基团，可在生物环境中保持分散状态，减少聚集与非特异结合。
• 激发/发射带宽适中：便于与其他染料组合使用，进行多通道标记或FRET研究。
• 适用体系广泛：兼容多种生物样品和材料表面，具备较强的普适性。

五、注意事项

• 荧光染料对光线较敏感，整个标记及储存过程中应尽量避免光照。
• 染料与目标分子的偶联效率受pH、反应时间及目标分子浓度影响，实验中建议优化条件。
• 对于分子量较小的目标或结构敏感的蛋白，标记量应适度控制，防止干扰其功能活性。

结语

AF594 Ethyl NHS Ester 是一款适用于多种生物标记需求的红橙色荧光染料试剂，具备良好的光谱性能、反应活性与生物兼容性。其在蛋白质标记、成像分析、探针开发等方面提供了可靠工具，特别适合需要高光稳定性、强荧光信号与多通道检测能力的科研项目。

AF594 Ethyl NHS Ester

规格选择： 多种规格，包含50 mg、100 mg、250 mg、500 mg等

物理形态： 可根据需求提供固体、粉末或溶液形式

储存条件： 建议冷藏保存，以维持产品的稳定性和活性

推荐试剂： AF594 Ethyl NHS Ester 5(6)-Carboxynaphthofluorescein，128724-35-6 AF 405 C6 NHS Ester ATTO 550 NHS Ester 62796-23-0，Merocyanine 540 22366-93-4，Cyanine3 DiC18 CAS：1419639-70-5，Dabcyl C2 maleimide 6-Carboxyrhodamine 110 NHS Ester CAS：82855-39-8，5-JOE ATTO 550 OMe 400763-55-5，Cy3-OH

备注： 信息整理 / 编辑：kx