一、CoroNa Green, AM钠离子荧光探针试剂特点：

CoroNa Green, AM 是一种细胞可渗透型钠离子（Na⁺）荧光探针，其核心特点是利用冠醚结构特异性结合钠离子，结合后绿色荧光显著增强，且兼容常规FITC滤光系统，适用于活细胞实时钠离子成像。 具体特点如下：

1.分子结构与工作原理

CoroNa Green 由荧光素类母体与冠醚结构（Na⁺结合位点）偶联而成。AM酯（乙酰氧甲基酯）修饰赋予其细胞膜通透性：

进入细胞：AM酯形式可自由穿过细胞膜

胞内水解：进入细胞后被胞内非特异性酯酶水解，脱去AM酯基团，转化为带负电荷的CoroNa Green活性形式

离子捕获：水解产物带电荷，无法再穿过细胞膜，被"困"在细胞内

荧光响应：当胞内Na⁺浓度升高时，Na⁺与冠醚结合，荧光强度显著增强，波长几乎不变

2.荧光优势：

可见光激发：492 nm激发波长，无需紫外光，减少对细胞的光损伤

仪器兼容性好：兼容任何能检测荧光素的设备，包括共聚焦显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪和荧光光度计

响应范围广：Kd约80 mM，可响应较宽范围的细胞内Na⁺浓度变化

3.细胞渗透性与加载优势

分子量小：CoroNa Green分子量仅586 Da，远小于Sodium Green（1668 Da）和SBFI（907 Da），更小的分子尺寸使AM酯形式能更高效地加载进入细胞

加载简便：直接将AM酯加入细胞培养基中孵育即可，无需显微注射或膜片钳灌注

AM酯分子量：657.62 Da，纯度≥90%（HPLC）

4.选择性与特异性

Na⁺选择性：冠醚空腔尺寸专为Na⁺设计，在生理浓度的K⁺、Ca²⁺、Mg²⁺等单价/二价阳离子存在下，仍能特异性响应Na⁺浓度变化

pH稳定性：对pH变化稳定，在生理pH范围内荧光响应不受干扰

无波长漂移：结合Na⁺后荧光强度增强，但激发/发射波长几乎不变

总结：CoroNa Green, AM 是目前活细胞Na⁺成像中常用的探针之一。相比传统SBFI（需紫外激发、分子量大、加载困难），它具有可见光激发、分子量小、加载效率高、仪器兼容性好等显著优势，特别适合共聚焦显微镜下的实时钠离子动态监测。

二、技术参数：

中文名：钠离子指示探针

英文名：CoroNa Green, AM, Cell Permeant ，CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester

供应商：陕西新研博美生物科技

分子量：657.62

激发峰（Ex）：~492 nm

发射峰（Em）：~516 nm

消光系数（ε）：68,000 L·mol⁻¹·cm⁻¹

解离常数（Kd）：~80 mM

三、CoroNa Green, AM操作要点：

CoroNa Green, AM的操作要点可概括为：无水DMSO配母液、无血清缓冲液稀释、37°C孵育30–60分钟、洗涤后脱酯15–30分钟、FITC通道检测，全程避光并配合Pluronic F-127助溶与原位校准。 具体操作流程与关键注意事项如下：

1.储存液配制

平衡至室温：将-20°C保存的冻干粉取出，室温平衡至少20分钟后再开盖，避免冷凝水进入

低速离心：开盖前先低速离心，使管壁上的粉末沉至管底

溶剂选择：使用高质量无水DMSO溶解，配制成1–10 mM储存液。例如：50 μg固体（MW 657.62）加入15 μL DMSO → 约5 mM储存液

分装冻存：小量分装后≤-20°C避光干燥保存，避免反复冻融（会导致AM基团水解失效）

2.工作液配制

稀释溶剂：用生理缓冲液（如HBSS）或无血清培养基稀释储存液

工作浓度：0.5–10 μM，初次使用务必摸索多个梯度浓度以确认最佳工作浓度

添加助溶剂：强烈建议加入Pluronic F-127（0.02%–0.1%），提高探针的水溶性和胞内加载效率，防止染料聚集

现配现用：工作液必须新鲜配制，不可长时间存放

3.细胞染色流程

第一步：孵育加载

将工作液加入细胞培养体系，37°C孵育30–60分钟

神经元等特殊细胞可适当缩短至15分钟，以减少酯酶过度水解

第二步：洗涤去游离染料

用PBS或无钠缓冲液冲洗3次，去除胞外游离探针，降低背景噪声

第三步：脱酯孵育（去酯化）

洗涤后在无染料的平衡缓冲液中继续孵育15–30分钟，促进AM酯在胞内充分水解为活性形式

第四步：荧光检测

使用FITC或GFP通道：激发488–495 nm / 发射510–530 nm

兼容共聚焦显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等设备

4.使用注意事项

加载时避免血清：血清中的酯酶会过早水解AM酯，导致染料在胞外被激活，增加背景噪音

现配现用：工作液需新鲜配制，避免降解

需原位校准：由于胞内环境（pH、离子强度、蛋白结合等）会影响Kd值，建议使用gramicidin（短杆菌肽）进行原位校准

非比率型探针：荧光强度受细胞厚度、染料浓度等因素影响，建议配合离子不敏感的参考染料（如Alexa Fluor 594 dextran）进行归一化校正

四、以下是与CoroNa Green, AM同属细胞内离子荧光探针产品，涵盖钠离子、钾离子、钙离子及其他功能离子探针：

• Sodium Green Tetraacetate（钠绿四乙酸酯，Na⁺荧光探针）

• SBFI AM（SBFI乙酰氧甲基酯，Na⁺比率型荧光探针）

• CoroNa Red Chloride（CoroNa红氯化物，线粒体靶向Na⁺荧光探针）

• Asante NaTRIUM Green AM（Asante钠绿AM酯，Na⁺荧光探针）

• PBFI AM（PBFI乙酰氧甲基酯，K⁺荧光探针）

• FluxOR Potassium Ion Channel Assay Kit（FluxOR钾离子通道检测试剂盒，基于Tl⁺替代的K⁺通道功能探针）

• Fluo-4 AM（Fluo-4乙酰氧甲基酯，Ca²⁺荧光探针）

• Fura-2 AM（Fura-2乙酰氧甲基酯，Ca²⁺比率型荧光探针）

• Cal-520 AM（Cal-520乙酰氧甲基酯，Ca²⁺荧光探针）

• Rhod-2 AM（罗丹明-2乙酰氧甲基酯，线粒体Ca²⁺荧光探针）

• BCECF AM（BCECF乙酰氧甲基酯，pH荧光探针）

• DiBAC₄(3)（双-(1,3-二乙基硫代巴比妥酸)三甲川氧代醇，膜电位荧光探针）

• DAF-FM DA（二氨基荧光素-甲醛二乙酸酯，NO荧光探针）

• MQAE（N-乙氧羰基甲基-6-甲氧基喹啉鎓溴化物，Cl⁻荧光探针）

• 6-NBDG（6-氮杂-2-NBD葡萄糖，葡萄糖摄取荧光探针）

（以上产品均基于AM酯细胞膜通透性设计（CoroNa Red除外，其利用正电荷靶向线粒体），与CoroNa Green, AM共享相同的"AM酯加载→胞内酯酶水解→离子响应荧光"工作原理，可根据研究所需的离子类型、荧光波段和检测模式（强度型/比率型）选择对应的探针。）

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